用COLD-PCR方法提高BCR-ABL1激酶区耐药突变检测灵敏度

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目的

探讨用低变性温度共扩增PCR(COLD-PCR)方法提高BCR-ABL1融合基因激酶区耐药突变检测灵敏度的可行性。

方法

本研究为实验诊断研究。设计常规巢式PCR(CN-PCR)和COLD-PCR方案扩增BCR-ABL1激酶区全长,扩增产物纯化后用Sanger测序法检测激酶区突变(KDM)。采集32例经伊马替尼(IM)治疗并出现耐药的慢性粒细胞性白血病(CML)患者和20例初诊CML患者外周血或骨髓标本,用上述2种方案检测标本中的KDM。用PCR扩增和基因克隆方法鉴定患者标本中KDM所占比例。制备含不同KDM比例的标准品,对比分析2种方法的检测灵敏度。

结果

32例IM耐药患者中,共检出15种KDM。其中用CN-PCR方法检出23例(71.9%)KDM阳性,用COLD-PCR检出28例(87.5%)KDM阳性。在20例初诊CML患者中,用CN-PCR未检出KDM,用COLD-PCR方法检出1例有p.E459K突变,突变型基因比例为3.5%。对于16种不同类型的KDM,COLD-PCR方法可提高检测灵敏度4~12倍。

结论

用COLD-PCR方法可有效提高BCRABL1激酶区耐药突变的检测灵敏度,有助于早期发现耐药突变。(中华检验医学杂志,2013,36:246-251)

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